Обнаружена новая мишень-хозяин, способная блокировать вирус гепатита Е

Новая мишень для гепатита Е

Вирус гепатита Е (ВГЕ) является основной причиной острого вирусного гепатита, однако противовирусное лечение по-прежнему ограничивается применением рибавирина не по назначению. Рибавирин может вызывать значительную токсичность, противопоказан во время беременности и не всегда приносит пользу каждому пациенту. В поисках альтернативных методов лечения Ринг и его коллеги проверили соединения, которые влияют на эндоцитарные и эндолизосомальные пути — внутриклеточную транспортную систему, используемую ВГЕ во время проникновения в клетку.

Среди протестированных соединений апилимод оказался наиболее мощным ингибитором. Апилимод нацелен на PIKfyve, фосфоинозитидкиназу, которая регулирует организацию поздних эндосом и лизосом. Апилимод, ралоксифен, верапамил, хлорохин и тамоксифен ингибировали инфекцию ВГЕ в зависимости от дозы, но апилимод продемонстрировал самую сильную активность, достигнув наномолярной активности в клетках HepG2/C3A.

PIKfyve необходим для вирусного входа

Исследователи подтвердили, что противовирусный эффект связан с PIKfyve, а не с другим действием апилимода. Замалчивание PIKfyve с использованием малой интерферирующей РНК снижало инфекцию ВГЕ примерно на 40%, в то время как два дополнительных ингибитора PIKfyve, YM201636 и APY0201, также подавляли инфекцию.

Эффект наблюдался как в отношении вирусных частиц с квазиоболочкой, так и без оболочки, а также в отношении различных штаммов ВГЕ, что указывает на то, что зависимость от PIKfyve может быть широко консервативным признаком инфекции ВГЕ.

Эксперименты по времени добавления и репликонам дополнительно определили затронутую стадию жизненного цикла вируса. Ингибиторы PIKfyve оставались эффективными при введении примерно в первые часы после инокуляции вируса, но не ингибировали репликацию РНК ВГЕ, когда проникновение клеток было экспериментально обойдено. Таким образом, апилимод в первую очередь действует как ингибитор проникновения, а не воздействует непосредственно на механизм репликации вируса.

Нарушение лизосомального пути, используемого ВГЕ

Механистические эксперименты показали, что ингибирование PIKfyve приводит к увеличению лизосом, уменьшению LAMP1- и CD63-положительных компартментов и нарушению доставки входящих геномов HEV в поздние эндосомальные и лизосомальные везикулы.

Апилимод также снижал созревание и активность катепсинов B и L. Считается, что эти лизосомальные протеазы обрабатывают капсид ВГЕ и способствуют высвобождению вирусного генома в цитоплазму. Таким образом, исследование связывает везикулярную организацию, контролируемую PIKfyve, с протеазно-зависимым разрушением вируса, обеспечивая последовательное механистическое объяснение блокады проникновения ВГЕ.

Данные на гепатоцитах человека и животных.

Важно отметить, что апилимод уменьшал инфекцию ВГЕ в первичных гепатоцитах человека без соответствующей потери жизнеспособности клеток, хотя эффективные концентрации были выше, чем те, которые необходимы в клеточных линиях гепатомы.

Соединение также было протестировано на крысах, зараженных крысиным ВГЕ. Животные получали апилимод в дозе 75 мг/кг один раз в день в течение 12 дней. Лечение значительно изменило траекторию фекального выделения вируса и снизило уровни вирусной РНК в нескольких образцах тканей. Однако снижение общей площади под кривой фекальной вирусной нагрузки не достигло общепринятой статистической значимости, что подчеркивает предварительный характер данных in vivo.

Трансляционное обещание и оставшиеся вопросы

Это исследование позиционирует PIKfyve как фактор лекарственной зависимости от хозяина для HEV и повышает возможность повторного использования апилимода, который ранее прошел клинические испытания по другим показаниям. Нацеливание на путь хозяина также может создать более высокий барьер для устойчивости к вирусу, чем терапия, направленная против вирусного белка.

Тем не менее, результаты остаются доклиническими. Инфекция RatHEV не полностью воспроизводит заболевание HEV у человека, и PIKfyve выполняет важные физиологические функции в эндолизосомном гомеостазе. Будущие исследования должны установить соответствующее терапевтическое воздействие, сроки лечения, тканеспецифическую токсичность, активность против дополнительных генотипов ВГЕ человека и эффективность при хронической или установленной инфекции. Клиническая разработка в конечном итоге потребует доказательств того, что противовирусные концентрации могут быть безопасно достигнуты у пациентов.